实时荧光定量PCR技术(Real-Time Quantitative PCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 实时荧光定量PCR技术以其特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、速度、全封闭反应等优点成为了分子生物学研究中的重要工具。 Q-PCR有三个特别重要的指标 扩增溶解曲线 扩增曲线是PCR过程中,以循环数为横坐标,以荧光强度为纵坐标所绘制的曲线。主要用于反映Q-PCR的动态进程。 溶解曲线是用来验证扩增产物特异性的,如果产物是单一条带,溶解曲线就会出现单峰;如果有引物二聚体或其它非特异性扩增,就会出现至少两个峰。 荧光阈值 一般将PCR反应前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号,荧光域值是PCR3-15个循环荧光信号标准差的10倍,荧光域值设定在PCR扩增的指数期(分为基线期、指数期以及平台期)。 Ct值 PCR扩增过程中,扩增产物的荧光信号达到设定的阈值时所经过的扩增循环次数。 青岛菲优特检测有限公司以科学研究为首任,以客户为中心,在严格的程序下开展检测工作,为客户提供科学的检验检测、研发分析服务。